顯微鏡-臨床顯微鏡使用
一、操作方法及步驟:顯微鏡取材,未能固定的組織取材,不能太大太厚,厚者冰凍費時,大者難以切完整,最好爲24×24×2mm。
取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍台上,冰凍。小組織的應先取一支承器,滴上包埋劑讓其冷凍,形成一個小台後,再放上細小組織,滴上包埋劑。
將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機持承器上,啓動粗進退鍵,轉動旋鈕,將組織修平。
調好欲切的厚度,根據不同的組織而定,原則上是細胞密集的薄切,纖維多細胞稀的可稍爲厚切,一般在5~10um間。
二、冰凍切片時的注意事項:
防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應保持幹淨,需經常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片後就用紙擦一次。因爲這個地方是切片通過和附貼的地方,如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上,將會破壞甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。
多例多塊組織同時需做冰凍切片時,可各自放于不同的支承器上,于冷凍台上凍起來,然後依據不同的編號,依序切片,這樣做既不費時也不會亂。
放置組織冰凍前,應視組織的形狀及走勢來放置,所謂“砍柴看柴勢”,切片也是如此,如果胡亂放置,就不能收到很好的效果。
組織塊不須經各種固定液固定,尤其是含水的固定液,在未達到固定前,更不能使用。臨床快速冰凍切片,不須要預先固定,一是爲了爭取時間,二是固定了的組織,反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片,就會出現冰晶。這是因爲含水的固定液在組織未經固定前,其中的水份也可滲入到組織中去,當冰凍發生時,這些水份就存留于組織中,形成了冰晶。
當切片時,如果發現冰凍過度時,可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調高冰凍點。
用于附貼切片的載玻片,不能存放于冷凍處,于室溫存放即可。因爲當附貼切片時,從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時,由于兩種物質間溫度的差別,當它們碰撞在一起時,分子彼此間發生轉移而産生了一種吸附力,使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度相同,沒有發生上述的現象。
三、冰凍切片的快速染色方法:
切片固定30秒-1分鍾。
水洗。
染蘇木素3-5分鍾。
分化。
于堿水中返藍20秒。
伊紅染色10-20秒。
脫水,透明,中性樹膠封固。
冰凍組織1-2分鍾,切片1分鍾,固定1分鍾,染色共五分鍾。總共在10分鍾內完成快速制片過程,結果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種,如甲醇循環的半導體冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,半導體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等,這些方法在目前來說已很少使用,因此在這裏不作闡述。
常規方法:
(1)冰凍切片固定 10~30 s
(2)稍水洗 1~2 s
(3)蘇木精液染色(60℃) 30~60 s
(4)流水洗去蘇木精液 5~10 s
(5)1%鹽酸乙醇 1~3 s
(6)稍水洗 1~2 s
(7)促藍液返藍 5~10 s
(8)流水沖洗 15~30 s
(9)0。5%曙紅液染色 30~60 s
(10)蒸餾水稍洗 1~2 s
(11)80%乙醇 1~2 s
(12)95%乙醇 1~2 s
(13)無水乙醇 1~2 s
(14)石炭酸二甲苯 2~3 s
(15)二甲苯() 2~3 s
(16)二甲苯() 2~3 s
(17)中性樹膠封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用無水乙醇,染色結果爲:細胞核藍色、胞質、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一的紅色。
封片 切片染色後封片常用中性樹膠,酸性的樹膠可使胞核褪色,如樹膠放置時間過長,因氧化而變酸。中性樹膠可用二甲苯稀釋。樹膠過濃,封片時容易導致氣泡;過稀,封片時易使膠外溢,影響美觀,也會出現由于二甲苯揮發後缺膠的現象。
精品應用推薦:網頁設計,五路財神廟,睫毛增長,雷射除毛
- May 17 Thu 2012 16:47
顯微鏡-臨床顯微鏡使用
close
全站熱搜
留言列表