顯微鏡-臨床顯微鏡使用
一、操作方法及步驟：顯微鏡取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整，最好爲24×24×2mm。
取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍台上，冰凍。小組織的應先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個小台後，再放上細小組織，滴上包埋劑。
將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啓動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍爲厚切，一般在5～10um間。
二、冰凍切片時的注意事項：
防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應保持幹淨，需經常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片後就用紙擦一次。因爲這個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放于不同的支承器上，于冷凍台上凍起來，然後依據不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會亂。
放置組織冰凍前，應視組織的形狀及走勢來放置，所謂“砍柴看柴勢”，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。
組織塊不須經各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預先固定，一是爲了爭取時間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現冰晶。這是因爲含水的固定液在組織未經固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當冰凍發生時，這些水份就存留于組織中，形成了冰晶。
當切片時，如果發現冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調高冰凍點。
用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因爲當附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質間溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子彼此間發生轉移而産生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度相同，沒有發生上述的現象。
三、冰凍切片的快速染色方法：
切片固定30秒-1分鍾。
水洗。
染蘇木素3-5分鍾。
分化。
于堿水中返藍20秒。
伊紅染色10-20秒。
脫水，透明，中性樹膠封固。
冰凍組織1-2分鍾，切片1分鍾，固定1分鍾，染色共五分鍾。總共在10分鍾內完成快速制片過程，結果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環的半導體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來說已很少使用，因此在這裏不作闡述。
常規方法：
(1)冰凍切片固定 10～30 s
(2)稍水洗 1～2 s
(3)蘇木精液染色(60℃) 30～60 s
(4)流水洗去蘇木精液 5～10 s
(5)1%鹽酸乙醇 1～3 s
(6)稍水洗 1～2 s
(7)促藍液返藍 5～10 s
(8)流水沖洗 15～30 s
(9)0。5%曙紅液染色 30～60 s
(10)蒸餾水稍洗 1～2 s
(11)80%乙醇 1～2 s
(12)95%乙醇 1～2 s
(13)無水乙醇 1～2 s
(14)石炭酸二甲苯 2～3 s
(15)二甲苯() 2～3 s
(16)二甲苯() 2～3 s
(17)中性樹膠封固。
注：第(14)步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無水乙醇，染色結果爲：細胞核藍色、胞質、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一的紅色。
封片 切片染色後封片常用中性樹膠，酸性的樹膠可使胞核褪色，如樹膠放置時間過長，因氧化而變酸。中性樹膠可用二甲苯稀釋。樹膠過濃，封片時容易導致氣泡；過稀，封片時易使膠外溢，影響美觀，也會出現由于二甲苯揮發後缺膠的現象。
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